上海动物实验室服务介绍 英瀚斯生物科技公司yy注册

实验步骤

1、实验之前，一定要确保高架十字迷宫整个装置的清洁。这个步骤不仅仅是要求当天的实验，更加侧重于每一次动物实验完成后的清洁除味工作，一定要去除上一只动物在宫体内遗留下来的尿液、粪便等，尽可能创造一个清洁、无味道的理想试验环境。同时，实验员需要记录动物的编号、日期、状态等信息；实验动物提前运送到行为学实验室临时笼架 ,

适应环境至少3H左右, 减少动物紧张。

2、将实验动物（大鼠或者小鼠）从饲养笼中取出，实验动物尽量背向实验员，将动物轻轻放在仪器宫体的中央区域，动物面向开臂，然后实验员迅速安静的离开；

3、打开SuperMaze或者VisuTrack动物行为分析软件，跟踪动物在高架十字迷宫仪器内的轨迹运动，自动计算指标，通常实验时长为5min；

4、实验结束后，取出实验动物，放入饲养笼，做好实验完成动物的标记信息，同时，用酒精和纸巾清洁迷宫。

灌注固定主要用于神经系统，其他组织意义不是很大，而且耗时耗力。对神经系统防止变性效果较好！

小鼠灌注

灌流固定小鼠时一般采用输液器的针头 (4 号半，这样肉眼可见就是肺部明显充气胀大变白，针头要从心轴方向进针，然后刺入心尖 3~4 毫米左右就可以了，开始灌流后剪破右心耳，约 40 毫升生理盐水，后再灌流约 20 毫升多聚甲醛，整个灌流固定的过程就完成了。

灌注固定主要用于神经系统，其他组织意义不是很大，而且耗时耗力。对神经系统防止变性效果较好！

小鼠灌注

灌流固定小鼠时一般采用输液器的针头 (4 号半，这样肉眼可见就是肺部明显充气胀大变白，针头要从心轴方向进针，然后刺入心尖 3~4 毫米左右就可以了，开始灌流后剪破右心耳，约 40 毫升生理盐水，后再灌流约 20 毫升多聚甲醛，整个灌流固定的过程就完成了。

ROS也就是活性氧（reactive oxygen species，ROS）指来源于氧的自由基和非自由基。ROS在细胞生命，应激和si亡中具介导作用，并且不同浓度的ROS在其中起着截然不同的作用，从而导致细胞命运的不同。因此对ROS的浓度或相对水平进行可靠的测量非常有必要。

实验仪器和材料

细胞培养基

胎牛xue清

青mei素/链mei素

胰酶

PBS

DMSO

活性氧（ROS）试剂盒

血球计数板

CO2培养箱

倒置荧光显微镜

1、细胞传代培养：当细胞长至80-90%时，去除培养基，加入PBS洗1-2次，去除PBS后，加入1ml胰酶消化1-3min后，加入3ml完全培养基中和胰酶终止消化，将消化的细胞转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min。倒掉上清后，加入3ml培养基重悬细胞，1:3传代至培养皿中培养。

2、将长到培养皿80%-90%的内皮细胞用胰酶消化下来，1000rpm离心，去除上清，加入完全培养基重悬细胞，将细胞分别种在6孔板中，每孔种1×106个细胞。3、待细胞贴壁后，使用不同的含药xue清的培养基培养细胞。3、待细胞贴壁后，使用不同的含药xue清的培养基培养细胞。4、48h后，加入DCFH-DA于培养基中，稀释倍数为1:1000。5、孵育1h后，直接将细胞置于荧光显微镜下拍照。

实验结果